产品货号：
BTN80810
中文名称：
SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒
英文名称：
SDS-PAGE Kit
产品规格：
30T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
SDS-PAGE是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为了解决此问题，本公司开发了本制品。
保存：包装一室温保存，包装二-20℃保存，可常温运输。
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- 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
- 安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
- 灵活，用于可以用30%的丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺母液，自行配制各种浓度的PAGE胶，满足分离不同大小蛋白质的需求。
- 使用含染料的改良浓缩胶缓冲液，浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
- 电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 | |
| 包装一 | 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺干粉（19:1） | 57g+3g |
| 4×分离胶缓冲液 | 200mL | |
| 4×改良浓缩胶缓冲液 | 100mL | |
| TEMED | 1.5mL | |
| 过硫酸铵 | 1g | |
| SDS-PAGE电泳液干粉 | 184g×2 | |
| 包装二 | 5×SDS-PAGE上样液 | 1mL |
保存：包装一室温保存，包装二-20℃保存，可常温运输。
- SDS-PAGE电泳液干粉一次性配完，368g可配20L。
- 第一次使用本制品时需先配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（下称30% AB溶液）
- 在本制品提供的装有57g丙烯酰胺/3g甲叉双丙烯酰胺干粉的瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃10～20分钟即得200mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（以下简称30%AB溶液）。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例在19:1时，PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。配好的30% AB溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。
- 根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表:
注：如果上样体积少于10μL，可以不需要浓缩胶。蛋白质大小范围(kD) 最佳浓缩胶浓度 最佳分离胶浓度 15-45 4% 15% 15-60 4% 12.5% 18-75 4% 10% 30-120 4% 7.5% 60-200 不需要 5% - 配制10%的APS（过硫酸铵）：称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中，摇晃溶解。没用完的10%APS溶液需4℃存放，一周后就不能再用。
- 配制分离胶溶液：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%的AB溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。
分离胶浓度 用量(单位：mL) 水 30%AB溶液 4×分离胶缓冲液 5% 5.83 1.67 2.50 6% 5.50 2.00 2.50 7% 5.17 2.33 2.50 7.5% 5.00 2.50 2.50 8% 4.83 2.67 2.50 9% 4.50 3.00 2.50 10% 4.17 3.33 2.50 11% 3.83 3.67 2.50 12% 3.50 4.00 2.50 13% 3.17 4.33 2.50 14% 2.83 4.67 2.50 15% 2.50 5.00 2.50 16% 2.17 5.33 2.50 - 配制浓缩胶溶液（一般使用4%的浓度）：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%AB溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL 4%浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
浓缩胶浓度 用量（单位：mL） 水 30%AB溶液 4×改良浓缩胶缓冲液 4% 6.17 1.33 2.50 - 将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10～15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应，胶凝固时间会更长）。
- 各加入50μL 10%APS和40μL TEMED（这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
- 先灌分离胶，在分离胶的液面距离顶部1.5cm的时候，停止灌胶。
- 由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的交接面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30～60分钟。也可以等分离胶在室温聚合30～60分钟，胶凝固后再灌制。
- 拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。本制品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2L去离子水中即得10×SDS-PAGE电泳液（测pH应该在8.3，如果不是8.3务必用NaOH或HCl调到8.3），用时再用去离子水稀释成1×工作液。
- 将凝胶板固定在电泳装置上，往上下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。
- 在待电泳的蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4μL样品中加1μL上样液)，100℃煮沸3～5分钟。短暂离心，取上清上样。
- 先用10 mA的电流电泳（对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
- 将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的染色等实验处理。
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